Весь контент iLive перевіряється медичними експертами, щоб забезпечити максимально можливу точність і відповідність фактам.
У нас є строгі правила щодо вибору джерел інформації та ми посилаємося тільки на авторитетні сайти, академічні дослідницькі інститути і, по можливості, доведені медичні дослідження. Зверніть увагу, що цифри в дужках ([1], [2] і т. д.) є інтерактивними посиланнями на такі дослідження.
Якщо ви вважаєте, що який-небудь з наших матеріалів є неточним, застарілим або іншим чином сумнівним, виберіть його і натисніть Ctrl + Enter.
Аналіз поліморфізму довжини рестрикційних фрагментів
Медичний експерт статті
Останній перегляд: 05.07.2025
Широке використання різних рестрикційних ендонуклеаз для аналізу хромосомної ДНК виявило величезну мінливість геному людини. Навіть невеликі зміни в кодуючих та регуляторних ділянках структурних генів можуть призвести до припинення синтезу певного білка або до втрати його функції в організмі людини, що зазвичай впливає на фенотип пацієнта. Однак приблизно 90% геному людини складаються з некодуючих послідовностей, які є більш мінливими та містять багато так званих нейтральних мутацій, або поліморфізмів, і не мають фенотипової експресії. Такі поліморфні ділянки (локуси) використовуються в діагностиці спадкових захворювань як генетичні маркери. Поліморфні локуси присутні у всіх хромосомах і пов'язані з певною ділянкою гена. Визначаючи локалізацію поліморфного локусу, можна встановити, який ген пов'язаний з мутацією, що спричинила захворювання у пацієнта.
Для виділення поліморфних ділянок ДНК використовуються бактеріальні ферменти – рестриктази, продуктом яких є сайти рестрикції. Спонтанні мутації, що виникають у поліморфних сайтах, роблять їх стійкими або, навпаки, чутливими до дії специфічної рестриктази.
Мутаційну мінливість у сайтах рестрикції можна виявити, змінюючи довжину фрагментів рестрикції ДНК шляхом їх розділення за допомогою електрофорезу та подальшої гібридизації зі специфічними ДНК-зондами. За відсутності рестрикції в поліморфному сайті на електрофореграмах буде виявлено один великий фрагмент, а за його наявності – менший фрагмент. Наявність або відсутність сайту рестрикції в ідентичних локусах гомологічних хромосом дозволяє досить надійно мітити мутантний і нормальний ген і відстежувати його передачу потомству. Таким чином, при вивченні ДНК пацієнтів, в обох хромосомах яких присутній сайт рестрикції в поліморфній області, на електрофореграмі будуть виявлені короткі фрагменти ДНК. У пацієнтів, гомозиготних за мутацією, що змінює поліморфний сайт рестрикції, будуть виявлені довші фрагменти, а у гетерозиготних пацієнтів – короткі та довгі фрагменти.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]