Вітамін А в крові

Референтні величини (норма) концентрації вітаміну А (ретинолу) в сироватці крові: у дітей 1-6 років - 0,7-1,5 мкмоль / л, 7-12 років - 0,91-1,71 мкмоль / л, 13 -19 років - 0,91-2,51 мкмоль / л; у дорослих - 1,05-2,09 мкмоль / л.

Вітамін А відноситься до жиророзчинних і існує в двох формах - власне вітамін А, або ретинол (міститься тільки в продуктах тваринного походження), і провітамін А, відомий як каротин (отримують з продуктів тваринного і рослинного походження), який може перетворюватися в ретинол в стінках травного тракту. Приблизно 50-90% надійшов з їжею ретинолу абсорбується в тонкій кишці і транспортується в пов'язаному з хіломікронамі комплексі в печінку, де зберігається у вигляді ретинолу пальмітату. При необхідності він вивільняється в кровотік у вигляді ретинолу, що знаходиться в комплексі з вітамін А-зв'язуючим білком. У сироватці крові комплекс вітамін А-зв'язуючий білок + ретинол зв'язується з транстиретин. З сироватки крові ретинол захоплюється клітинами-мішенями, такими як фоторецептори сітківки і епітелій.

При надходженні в організм вітаміну А в кількості, що перевищує потреби (180-430 мкг ретинолу в добу в залежності від віку, статі та фізіологічного стану), його надлишки відкладаються в печінці формуючи депо цього вітаміну. При зниженому надходженні ретинолу з їжею його запаси з печінки виділяються в кровотік, підтримуючи концентрацію ретинолу в сироватці крові на нормальному рівні (вище 0,7 мкмоль / л). Інші біологічно активні форми вітаміну А (ретиналь і ретиноевая кислота) присутні в крові в дуже низьких концентраціях (нижче 0,35 мкмоль / л); на ефіри ретинолу припадає приблизно 5% загального вітаміну А (0,1-0,17 мкмоль / л).

Вітаміну А належить важлива роль в окислювально-відновних процесах. Ретинол сприяє утворенню глікогену в печінці і м'язах, сприяє підвищенню вмісту холестерину в крові, бере участь в синтезі стероїдних і статевих гормонів. Він необхідний для росту і формування кісткового скелета, ресинтезу родопсину, а також сприяє нормальному функціонуванню слизових оболонок і покривного епітелію шкіри, попереджаючи його метаплазию, гіперкератоз і надмірне злущування. Вітамін А сприяє зміцненню волосся, зубів і ясен. В останні роки показана різноманітна роль вітаміну А в попередженні розвитку раку і регуляції імунітету (необхідний для завершення фагоцитозу, підвищує синтез Ig, стимулює утворення Т-кілерів, стимулює Т-хелпери II типу та ін.). Вітамін А - активний антиоксидант, переважно діє в присутності вітаміну Е; він захищає вітамін С від окислення. Дефіцит вітаміну А розцінюють як фактор ризику злоякісних новоутворень. В експериментальних роботах показано, що збільшення вмісту вітаміну А в харчовому раціоні збільшує медіану тривалості життя на 17,5%. Цинк - есенціальний кофактор метаболізму вітаміну А (необхідний для синтезу вітамін А-зв'язуючого білка).

Середня добова потреба в ретинолі для дорослих (20-50 років) становить 1,2 мг (4000 МО, 1 МО еквівалентна 0,3 мкг ретинолу), для вагітних - 1,5 мг (5000 МО), для годуючих грудьми - 1, 8 мг (6000 МО), для осіб старше 60 років - 2,5 мг (10 000 МО). Не менш третини добової потреби ретинолу має надходити в організм у готовому вигляді; інша частина може покриватися за рахунок вживання каротиноїдів, з яких в організмі утворюється ретинол. Слід враховувати, що приблизно 30% ретинолу в продуктах харчування руйнується при їх термічній обробці. Активність ретинолу в 2 рази вище, ніж каротину, крім того, останній лише на 30-40% всмоктується в кишечнику. Тому при оцінці харчового раціону вважають, що 1 мг ретинолу приблизно відповідає 6 мг каротиноїдів.

Визначення ретинолу (вітаміну А) і каротиноїдів в сироватці крові по Бесс в модифікації Л. А. Анісімовій

Принцип методу

Визначення вітаміну А і каротиноїдів засноване на їх гідролізі в лужному спиртовому розчині з подальшою екстракцією сумішшю органічних розчинників.

Реактиви

• 11 М розчин гідроксиду калію (КОН).
• 96% етиловий спирт.
• 1 М розчин гідроксиду калію (КОН) в 96% етиловому спирті: 1 обсяг 11 М розчину КОН змішують з 10 обсягами 96% етилового спирту. Реактив готують в день проведення дослідження. Якщо при змішуванні з'являється фарбування, спирт перед використанням слід очистити перегонкою.
• Ксилол, к.с.
• Октан, х.ч.
• Ксилол-октанового суміш: готують шляхом змішування рівних об'ємів ксилолу і октану.

Дослідження проводять на спектрофотометрі.

Хід визначення вітаміну А

Взяту з пальця кров (близько 1 мл) вносять в центрифужную про-бирку і ставлять на 20-30 хв в скляний стаканчик з теплою водою (температура 40-45 ° С). Для відділення сироватки згусток крові обережно обводять тонкою скляною паличкою по краю під стінами пробірки і центрифугують при 3000 об / хв протягом 10 хв.

Відбирають 0,12 мл сироватки і переносять в агглютінаціонние пробірку, куди потім додають 0,12 мл 1 М спиртового розчину гідроксиду калію. Вміст ретельно струшують.

Пробірки з пробами ставлять у водяну баню на 20 хв при температурі 60 ° С для проведення гідролізу.

Проби охолоджують і до них доливають по 0,12 мл ксилол-октанового суміші, інтенсивно струшують протягом 10-15 с. Знову охолоджують і центрифугують.

Обережно витягають пастерівської піпеткою з гумовим балончиком верхній шар, що містить вітамін А і каротиноїди, і переносять в мікрокювет.

Проби спектрофотометріруют при довжині хвилі 328 нм - для визначення вітаміну А, і при довжині хвилі 460 нм - для визначення каротиноїдів.

Після спектрофотометрії досліджувані проби піддають ультрафіолетовому опроміненню для руйнування вітаміну А. Для цих цілей на відстані 15-20 см від мікрокювет встановлюють кварцову (бактерицидну) лампу таким чином, щоб опромінення піддавалася частина кювети, заповненої рідиною; час опромінення 45-60 хв.

Проби повторно спектрофотометріруют при довжині хвилі 328 нм. Вміст вітаміну А визначають за різницею величин екстинкції (оптичної щільності) з урахуванням коефіцієнта (чинника) 637, обчисленого Bessey для вітаміну А.

Розрахунок проводять за формулою:

X = 637 × (Е328 (1) - Е328 (2)),

Де X - вміст вітаміну А, мкг / дл; 637 - коефіцієнт, обчислений Bessey для визначення вітаміну А; Е328 (1) - оптична щільність розчину до опромінення; Е328 (2) - оптична щільність розчину після опромінення.

Коефіцієнт для перекладу концентрації вітаміну А з мкг / дл в мкмоль / л - 0,035.

Вміст каротиноїдів розраховують за формулою:

X = 480-Е480,

Де X - вміст каротиноїдів, мкг / дл; 480 - коефіцієнт, обчислений Bessey для визначення каротиноїдів; Е480 - оптична щільність досліджуваного розчину.

Примітка

Згідно з даними Bessey, при проведенні досліджень можна брати більший або менший обсяг сироватки, однак співвідношення його з обсягом спиртового розчину повинно бути постійним при будь-якій зміні обсягу (кількості) ксилол-октанового суміші.

Норма в змісті вітаміну А в сироватці крові становить: у новонароджених і грудних дітей - 160-270 мкг / л; у дорослих - 1,05-2,45 мкмоль / л (300-700 мкг / л). Вміст каротиноїдів в сироватці крові дорослих - 800-2300 мкг / л.