13с уреазний тест: підготовка, результати, позитивний, негативний

З моменту відкриття бактерії Helicobacter pylori, пов'язаної з хронічним гастритом та виразкою шлунка та дванадцятипалої кишки, були розроблені методи діагностики, зокрема уреазний тест, який дозволяє виявити ці мікроорганізми у конкретного пацієнта, підтвердити їхню причетність до розвитку захворювань шлунково-кишкового тракту та призначити ефективне лікування.

Фермент уреаза як біомаркер гелікобактерної інфекції

Бактерії H. pylori захищають себе від кислого середовища в просвіті шлунка двома способами. По-перше, пошкоджуючи слизову оболонку своїми джгутиками, мікроорганізми досягають її нижніх шарів, аж до епітеліальних клітин, де pH вищий (тобто кислотність нижча). По-друге, бактерії нейтралізують кислоту, синтезуючи велику кількість каталітично активного високомолекулярного металоферменту уреази або сечовиноподібної амідогідролази.

Використання уреази в діагностиці Helicobacter можливе завдяки не лише цитоплазматичній активності цього ферменту, але й зовнішній взаємодії з клітинами хазяїна.

Під дією уреази відбувається розщеплення сечовини шлунка на нітрид водню (аміак) та вуглекислий газ (вуглекислий газ). Вони реагують з соляною кислотою шлункового соку та забезпечують зону нейтральної кислотності навколо H. pylori, а також підтримують метаболізм бактеріальних клітин.

Саме тому уреаза є найважливішим фактором колонізації H. pylori слизової оболонки шлунка людини, а виявлення уреолітичної активності вважається біомаркером вірулентності цієї бактерії, який гастроентерологи – шляхом проведення уреазного тесту – використовують для діагностики гелікобактерної інфекції, а також для контролю результатів медикаментозного знищення (ерадикації) бактерій.

Діагностика H. pylori включає інвазивні та неінвазивні тести – залежно від того, чи потрібне ендоскопічне дослідження шлунка (фіброгастродуоденоскопія). Інвазивним тестом є швидкий уреазний тест або експрес-уреазний тест (RUT-тест), який вимагає отримання зразків тканин (біопсії). 13C-сечовинозний дихальний тест (13C-UBT) є найпоширенішим неінвазивним тестом.

Слід зазначити, що неінвазивна діагностика H.pylori може бути проведена за допомогою аналізу крові на антитіла (специфічність на рівні 75%, чутливість – 84%), ІФА сечі (з чутливістю 96% та специфічністю 79%), та копрограми на бактеріальні антигени. Додаткова інформація – Інфекція Helicobacter pylori: антитіла до Helicobacter pylori в крові

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Показання уреазного тесту

Колонізація слизової оболонки шлунка H. pylori сама по собі не є захворюванням; це фактор підвищеного бактеріального навантаження на організм, що за певних умов може спровокувати розвиток низки патологій шлунка та верхніх відділів шлунково-кишкового тракту.

Показаннями для діагностики гелікобактерної інфекції, зокрема, уреазного тесту, є гастрит з підвищеною кислотністю, антральний та атрофічний гастрит, дуоденіт, виразкова хвороба шлунка та дванадцятипалої кишки, MALT-лімфома шлунка. Після ендоскопічної резекції раку шлунка на ранній стадії може бути проведене гістологічне дослідження в поєднанні зі швидким уреазним тестом - ФГДС з уреазним тестом.

Гастроентерологи можуть призначити уреазний тест, якщо пацієнти скаржаться на відчуття тяжкості та дискомфорту в епігастральній ділянці, часту печію після їжі, кислу або гнилу відрижку, гіркоту в роті, нудоту, кишкові розлади, ниючий або переймовий біль у шлунку.

[ 8 ], [ 9 ]

Підготовка

Підготовка до дихального тесту на сечовину 13C полягає у припиненні пацієнтом: прийому антибіотиків за 4 тижні до тесту, а НПЗЗ, інгібіторів протонної помпи (що знижують кислотність шлунка) та антацидів або адсорбентів, що використовуються від печії, – щонайменше за два тижні. Прийом будь-яких ліків слід припинити за п’ять-шість днів, а вживання алкоголю та куріння – за три дні до тесту.

Також рекомендується уникати вживання бобових культур приблизно за тиждень до тестування, оскільки квасоля, горох, сочевиця, соя та квасоля містять уреазу (яка захищає рослини від хвороб та комах-шкідників).

Увечері перед аналізом протипоказана пізня щільна вечеря; в день тестування слід проводити звичайну гігієну порожнини рота, а за півтори години до аналізу не можна нічого пити та вживати жуйку.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Техніка уреазного тесту

Техніка виконання:

• Спочатку береться базова проба дихання – видих робиться в м’який пластиковий контейнер (і герметично закривається);
• рідина з додаванням 13C-сечовини приймається перорально;
• Через 25-30 хвилин беруть другу пробу видихуваного повітря в іншу ємність.

Отримані таким чином зразки аналізують на мас-спектрометрі з розділенням ізотопів у другому зразку та визначенням їх концентрації. Різниця між значеннями у другому та першому зразках виражається як дельта (δ) порівняно з базовим рівнем. Нормальні значення, тобто негативні значення міченого атома 13C у неінфікованих пацієнтів, варіюються від 0,15-0,46%, а позитивні значення за наявності інфекції становлять 1,2-9,5% зі швидкістю гідролізу сечовини понад 12-14 мкг/хв.

Простіше кажучи: виявлення міченого 13C вуглекислого газу у видихуваному повітрі свідчить про гідроліз сечовини ферментом уреазою H. pylori, що, власне, підтверджує факт її присутності у шлунку.

Дихальний тест на H. pylori

13C-UBT-тест або 13C сечовинозний дихальний тест на Helicobacter pylori є одним з найважливіших неінвазивних методів виявлення цієї інфекції: завдяки 100% чутливості та 98% специфічності ризик хибнопозитивних та хибнонегативних результатів порівняно з гістологічним дослідженням та тестуванням крові на антитіла на 2,3% нижчий.

Аналіз базується на гідролізі перорально прийнятої рідкої сечовини, міченої атомом вуглецю (стабільний нерадіоактивний ізотоп) 13C (50-75 мг 13C-сечовини, розведеної у 100 мл рідини), уреазою H. pylori.

Сечовина, мічена ізотопним індикатором, піддається гідролізу в шлунку з виділенням аміаку та вуглекислого газу, що містить мічені атоми, який дифундує в кров і виводиться з легень під час дихання. Мічений вуглекислий газ реєструється аналітичним приладом - мас-спектрометром, робота якого базується на недисперсійній ізотопно-селективній спектроскопії, або інфрачервоним спектроскопічним аналізатором.

Швидкий уреазний тест

Швидкий уреазний тест (ШТУ) проводиться під час ендоскопічного дослідження шлунка та дванадцятипалої кишки – за допомогою сучасних ендофіброскопів – та одночасного забору зразків біопсії. Біоматеріал передбачається взяти з антрального відділу шлунка. Отже, фіброгастродуоденоскопія або ФГДС з уреазним тестом є інвазивним діагностичним методом.

Отриманий біопсійний матеріал повністю занурюють у підготовлене стандартизоване середовище, що містить агар-гель, сечовину, кислотно-лужний індикатор фенолсульфофталеїн та бактеріостатичний агент (доданий для запобігання росту забруднюючих мікроорганізмів та хибнопозитивних результатів).

Якщо у зразку тканини шлунка присутні бактерії H. pylori, уреаза, яку вони виробляють, гідролізує сечовину та підвищує pH, що чітко видно, коли індикатор змінює колір з жовтого на помаранчевий (при pH 6,8) та фіолетовий (при pH > 8). 75% позитивних тестів змінюють колір протягом 120-180 хвилин, і чим швидше змінює колір індикатор, тим більша кількість бактерій. Але тести, які виглядають негативними, зберігаються протягом 24 годин.

Позитивний експрес-тест на уреазу, що це означає? Позитивний RUT-тест – індикатор стає червоним – означає, що зразок біопсії, поміщений в агарове середовище, містить щонайменше 105 бактерій H. pylori, хоча їх концентрація зазвичай вища.

Чутливість різних модифікацій тесту коливається в діапазоні 90-98%, а специфічність – 97-99%.

Як зазначають гастроентерологи, якщо у висновку пацієнта зазначено різко позитивний уреазний тест (три хрестики), це означає: pH> 8, а індикатор змінив колір менш ніж за 60 хвилин з моменту занурення біоптату, що свідчить про велику кількість H.pylori та високий рівень експресії уреази. Приблизну кількість бактерій можна підрахувати під час гістологічного дослідження біоптату під мікроскопом, і якщо вона перевищує 40-50 у візуалізованій ділянці, рівень інфекції вважається високим.

Дихальний тест із сечовиною 13C рідко дає хибнопозитивні результати, і у пацієнтів із підозрою на виразку шлунка або дванадцятипалої кишки один позитивний тест вважається підтвердженням діагнозу, тоді як негативний результат слід підтвердити за допомогою ЕГДС із сечовиною.